关于多肽的一些基本常见知识
发布时间:2019-07-16阅读量:17720来源:本站

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大多数多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前,冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,最好的方法是以小的工作样量存放。

对于含Cys, Met orTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解必不可少,因为这种多肽可易空气氧化,在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比,生命期有限。



溶解性

大多肽的道选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽,需要DMF、脲、guanidiniamchloride或acetonitnle来溶解,这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。


残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。

保存操作

包装 1mg或更少的多肽按净重包装,声明的小瓶重不含相关抗离子和水。 例如,氨基酸分析决定的肽含量是80%,在1mg样品中,那么瓶中毛重是1.25mg。


大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水,例如,25mg样品中肽百分比为90%,那么,实际肽量为25mg×90%=22.5mg

不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%, 而肽含量相关带电基团(如Arg, Lys)的抗离子量和肽新水性决定。这是合成肽的本身特性。



冻干肽的保存

所有产品应存于冰箱, 最好为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。




肽溶液的保存

溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性pH(pH5-7), -20℃保存的,为避免样品的反复冻融,最好分成小样存放。一份样品融冻后未用完, 应扔掉,细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦, 为克服此,肽应溶于无菌水, 或肽溶液用0.2μM滤膜过滤。




多肽的重建和操作

多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时,要注意使初始浓度比要求浓度大,如果多肽仅有限溶解性,这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。

如果多肽在水中的溶解性有限,有几种选择可帮助溶解:

对碱性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)

酸性肽用稀氨水(含Asp, Glu)

对极疏水的肽用10%有机修饰物(Acetonitnile , Methanol)

极不溶的肽用DM50或DMF

guanicline hydrochloride或脲的浓溶液也很有用, 与上述方法合用, 声处理也是溶解多肽的有效手段。



多肽的包装

目录中所有多肽除特别说明外,纯度为95~98%。包装为小瓶冻干粉。除特别注明外,多肽净重包装, 例如,1mg瓶的β-amyloid1-40精确含1mg的多肽。多肽净重由氨基酸分析得到的肽含量计算。例如,一个多肽样品毛重5mg,氨基酸含量85%,多肽净重为5mg×0.85=4.25mg。

请注意,多肽含量不是多肽纯度,与抗离子象乙酸盐和溶剂,特别是水结合量合成多肽的本身特性。多肽纯度可能达100%,但合成品中多肽含量由氨基酸组成,硫水性,和多肽对溶剂和离子的暴露决定,特别是在纯化过程中,无论多肽如何纯,冻干粉多肽含量一般为70-85%。剩余15-30%由其它基本非肽成份构成。



多肽应用保存

多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外,这点都会发生,在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率,可用声处理。溶解仍有问题,加少量稀乙酸(10%)或氨水,会便于溶解。

要长期保存多肽, 最好冷冻干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。多肽易受细菌降解,应用无菌纯化水溶解。

含有Met, Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化,寿命有限。应溶于无氧溶剂, 为防止重复冻融的破坏,建议溶解过量的肽的便实验,其余多肽以固体形成保存。



固相多肽合成Fmoc方法

任何多肽链的关键连接为肽键,由一个氨基酸的氨基与另氨基酸的缩合形成。通常一个氨基酸由一个中心碳原子组成,它由四个基它基团包围: 氨基、羰基、基和侧链。 侧链,称为R,区别不同氨基酸的结构。某些侧链含有干扰肽键形成的功能团。因此侧链功能团的封闭很重要。





上图显示了Fmoc合成的一般流程,首先第一个Fmoc氨基酸通过一个酸性接头接到不溶载体树脂上,Fmoc去保护通过用碱处理树脂来完成,一般是Poperidine。 用预先激活或原位激活连接第二个Fmoc氨基酸。要求总多肽合成后,通过TFA分离来除去树脂和去保护。

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